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產(chǎn)品名稱(chēng)：CY5.5-NTA-Ni，熒光標(biāo)記糖類(lèi)

制備與優(yōu)化

（1）CY5.5-NTA-Ni制備流程

材料準(zhǔn)備：

NTA溶解于MES緩沖液（pH 6.0，50 mM）。

CY5.5-胺溶解于DMSO（濃度≤1 mM，避光）。

Ni2?螯合：

加入NiCl?（NTA:Ni2?摩爾比=1:1），室溫反應(yīng)30 min。

熒光標(biāo)記：

加入EDC（2 mM）和NHS（5 mM），活化羧基30 min。

加入CY5.5-胺（NTA:CY5.5摩爾比=1:3），避光反應(yīng)4 h。

純化與表征：

透析：使用3.5 kDa MWCO透析袋去除未反應(yīng)染料（含5 mM EDTA的PBS，4℃）。

標(biāo)記效率：通過(guò)熒光分光光度法測(cè)定（λex=675 nm，λem=695 nm）。

螯合能力驗(yàn)證：通過(guò)His-tag蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)（如GFP-His?）評(píng)估功能保留。

（2）關(guān)鍵優(yōu)化參數(shù)

pH控制：羧基活化推薦pH 6.0（平衡活化效率與Ni2?穩(wěn)定性）。

離子強(qiáng)度：添加NaCl（0.15 M）屏蔽靜電排斥，提升標(biāo)記效率。

Ni2?保護(hù)：標(biāo)記前加入過(guò)量Ni2?（10倍摩爾比），避免螯合位點(diǎn)被染料占據(jù)。

溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)！wyh

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